Разработка состава мазей для применения в дерматологии и их исследование

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И БИОЛОГИЯ

УДК 615.076.8:615.322

Ю.Г. Афанасьева, Т.В. Сысоева, Ф.Х. Кильдияров

РАЗРАБОТКА СОСТАВА МАЗЕЙ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ДЕРМАТОЛОГИИ

И ИХ ИССЛЕДОВАНИЕ

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа

Разработан и предложен оптимальный состав мази противоаллергического действия с сухим экстрактом из сбора лекарственного растительного сырья. Обоснована технология приготовления и определены основные биофармацевтические показатели предлагаемого состава мази. Установлены сроки годности и условия хранения прописи мази противоаллергического действия.

Ключевые слова: мазь, противоаллергическое действие, сухой водорастворимый экстракт, лекарственное растительное сырье.

Yu.G. Afanasyeva, T.V. Sysoeva, F.Kh. Kildiyarov DEVELOPMENT OF A COMPOSITION AND INVESTIGATION OF OINTMENTS FOR APPLICATION IN DERMATOLOGY

The optimal composition of antiallergenic ointment with a dry extract from herbal material has been developed and offered here. In the article the technology of preparation has been proved and the basic biopharmaceutical indicators of the offered ointment composition have been defined. In this investigation use-by dates and storage conditions for antiallergenic ointments have been determined.

Key words: ointment, antiallergenic action, a dry water-soluble extract, crude drugs.

Стремительное развитие цивилизации, ухудшение экологического состояния окружающей среды приводят к росту аллергической заболеваемости. Проведенные в ряде районов страны исследования показали, что в крупных промышленных центрах аллергическими болезнями страдает от 10 до 20% населения, а в сельской местности — всего 2-4%. В зарубежных странах в среднем 10-20% жителей имеют данную патологию, а распространённость некоторых аллергических нозологий достигает 80% [8, 9, 11, 12, 13]. Особенно настораживает рост числа аллергических заболеваний среди детей. По данным эпидемиологических исследований разных стран атопическим дерматитом страдают от 10 до 28% детей, а в России — от 5,2 до 15,5% [5, 14].

Мазь — наиболее часто употребляемая в дерматологии лекарственная форма. Правильно подобранные мазевые основы улучшают состояние кожных покровов, способствует лёгкому проникновению билогически активных веществ в кожу [2, 3, 10].

В связи с вышесказанным нами были проведены исследования по разработке состава мазевой лекарственной формы для применения в дерматологии.

Материал и методы

Объектом исследования служили прописи мази. Лекарственным компонентом мазевой лекарственной формы является водорастворимый сухой экстракт из сбора лекар-

ственного растительного сырья с установленным противоаллергическим действием [4, 10].

Биодоступность полученных образцов мазей исследовалась in vitro методом диализа через полупроницаемую мембрану и методом диффузии в гель. Для исследования биодоступности действующих веществ методом диализа использовали прибор, состоящий из стеклянного сосуда, закрытого крышкой, в котором укреплён полый цилиндр с внутренним диаметром 30 мм. Дном цилиндра служила целлофановая мембрана (марка МС АТ-100), предварительно смоченная водой очищенной. На внутреннюю поверхность мембраны наносили исследуемое количество мази (~0,2 г), цилиндр опускали в наружный сосуд, содержащий 50 мл воды очищенной. Прибор помещали в термостат (37±0,5°С). Отбор проб диализата проводили через определённые промежутки времени, восполняя их новой порцией воды очищенной.

Определение биодоступности методом диффузии в гель проводили следующим образом: приготовленный 6% желатиновый гель в количестве 20 мл разливали в чашки Петри. Через 24 часа в сформировавшемся геле вырезали диски (d ~8 мм). В образовавшиеся лунки помещали испытуемые образцы мазей (—0,15 г). Степень высвобождения веществ фиксировали через 24 часа по радиусу окрашенных зон. Для получения количественных характеристик биодоступности окрашенные зоны вырезали и спектрофотометрическим

методом определяли содержание в них фла-воноидов [1].

Установление сроков годности полученных образцов мазей проводили методом “ускоренного старения” [6] при температуре 30°С в термостате ТС — 80. В качестве упаковки использовали стеклянные баночки. Результаты и обсуждение При разработке технологии получения-мазевой лекарственной формы сухого водо-

растворимого экстракта были проведены исследования по выбору вспомогательных веществ, технологии получения и проверке стабильности в процессе хранения.

В качестве носителей нами были выбраны традиционные и современные основы и вспомогательные вещества, наиболее часто используемые в фармацевтической практике (табл. 1).

Таблица 1

Состав мазевых основ

Мазевые основы Компоненты и вспомогательные вещества мазевых основ, г

вазе-лин лано-лин пентол вода эмуль-гатор Т-2 воск НМПЭ Na- КМЦ МЦ

№ 1 Вазелин 100,0

№ 2 Вазелин-ланолин 60,0 40,0

№ 3 Основа Кутумовой 60,0 30,0 10,0

№ 4 Основа Г рецкого 40,0 4,0 64,0 2,0

№ 5 Na-КМЦ* 100,0

№ 6 МЦ** 100,0

*Натрий карбоксиметилцеллюлоза.

**Метилцеллюлоза.

Образцы мазей готовили по стандартным технологическим схемам в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи [7]. Сухой экстракт во все мазевые основы вводили с учётом получения 5% мази [7]. У мазей на эмульсионной основе проверяли аг-регативную устойчивость путем центрифугирования (5 мин., 6000 об/мин.). Мазь считали устойчивой, если после центрифугирования не наблюдалось расслоения.

С целью выбора оптимального состава мазевой основы были проведены биофарма-цевтические исследования in vitro методом диализа и методом диффузии в 6% желатиновый гель с последующей сравнительной оценкой динамики высвобождения действующих веществ. В полученных диализатах определяли содержание флавоноидов, по количеству которых стандартизируется сухой водорастворимый экстракт (рис. 1) [10].

Как видно из полученных данных, наибольшей высвобождающей способностью обладали мази на гидрофильных основах (МЦ, №-КМЦ). По высвобождающей актив-

ности мазевые основы можно расположить в следующей последовательности: МЦ > №-КМЦ > вазелин > основа Грецкого > основа

Кутумовой > ланолин-вазелин.

■ Вамммн ■ Biv.ih .ню.!» Otaou Kvtvmobob

■ Основа Гр»пког о —•— Na-КМЦ * МЦ

Время ибора проб, мим.

Рис. 1. Кинетика высвобождения флавоноидов из мазевых основ in vitro методом диализа

При исследовании биодоступности методом диффузии в 6% желатиновый гель устанавливали степень высвобождения веществ из образцов мазей через 24 часа по радиусу окрашенных зон с определением содержания в них флавоноидов. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2

Высвобождение сухого экстракта из мазевых основ в желатиновый гель_______________

Показатель № 1 Вазелин № 2 Вазелин-ланолин № 3 Основа Кутумовой № 4 Основа Грецкого № 5 №-КМЦ № 6 МЦ

Радиус окрашенных зон, мм 0 0 0,47±0,002 2,07±0,03 4,03±0,010 5,47±0,011

Содержание флавоноидов в пересчёте на рутин, % 0,01±0,0003 0,028±0,002 0,49±0,02 0,96±0,05 3,43±0,05 1,23±0,02

Из данных таблицы видно, что динамика высвобождения сухого экстракта в желатиновый гель из различных мазевых основ колеблется в пределах от 0 до 5,5 мм. Наиболее полное высвобождение наблюдалось из мазевых основ № 6, 5 ,4, 3 (в порядке убывания). Количественное содержание флавоноидов колеблется в пределах от 0,01 до 3,43 %, при этом наиболее полное высвобождение наблюдалось из прописей мазей на основах Na-КМЦ, МЦ и Грецкого (№ 5, 6, 4 соответственно).

Полученные результаты исследования биодоступности in vitro методом диализа и диффузии в 6% желатиновый гель сравнимы между собой (табл. 2; рис. 1).

Мазевая основа № 6 (МЦ) дает хорошие результаты биодоступности, но такая мазь быстро высыхает с образованием плотной пленки, и сильно подвержена микробному обсеменению, поэтому в дальнейшем нами не исследовалась.

Проведенные исследования позволили установить наиболее оптимальный, на наш взгляд, состав прописей мазей, содержащих сухой водорастворимый экстракт противоаллергического действия: на основах № 5 (№-КМЦ) и № 4 (основа Грецкого) (табл. 1).

О стабильности предлагаемых прописей мазей в процессе хранения судили по количественному содержанию флавоноидов в пересчете на рутин (С,%), рН водного извлечения. Для основы Грецкого определяли агрегатив-ную устойчивость (АУ) (табл. 3).

Из данных таблицы видно, что исследуемые мази сохраняют свои свойства в течение 1 года хранения. К 1,5 года хранения несколь-

ко снижается содержание флавоноидов (до 3,05 и 0,89), в мази на основе Грецкого наблюдается расслоение.

Таблица 3

Показатели стабильности мазей с сухим экстрактом

противоаллергического действия в процессе хранения

Срок хранения Показатель Основа № 6 (Na-КМЦ) Основа № 4 (основа Г рецкого)

контроль рН 5,85±0,11 5,53±0,09

С, % 3,48±0,09 0,97±0,02

АУ стабильна

1 месяц рН 5,73±0,10 5,39±0,11

С, % 3,46±0,10 0,96±0,03

АУ стабильна

3 месяца рН 5,61±0,14 5,28±0,12

С, % 3,47±0,08 0,97±0,04

АУ стабильна

6 месяцев рН 5,55±0,11 5,22±0,13

С, % 3,46±0,08 0,96±0,02

АУ стабильна

1 год рН 5,51±0,12 5,20±0,10

С, % 3,45±0,07 0,96±0,04

АУ стабильна

1,5 года рН 5,45±0,11 5,01±0,09

С, % 3,05±0,08 0,89±0,03

АУ расслоение

В процессе исследования стабильности было замечено, что изучаемые прописи мази подвергаются микробному обсеменению. Для микробиологической стабилизации предлагаемых мазевых композиций были выбраны следующие консерванты: бензойная кислота, нипагин, нипазол, а также смесь нипагина с нипазолом. Результаты проведенных микробиологических исследований представлены в табл. 4.

Полученные данные показывают, что наиболее оптимальным консервантом для исследуемых мазей является смесь нипагина с нипазолом (7,5:2,5): рост колоний микроорганизмов не наблюдался даже при использовании минимальной концентрации (табл. 4).

Таблица 4

Консерванты и их концентрация для стабилизации мазей на основах № 4 и 5_____________________________

Консервант Бензойная кислота Нипагин Нипазол Смесь нипагина-нипазола (7,5 : 2,5)

С, % 0,05 0,1 0,5 0,05 0,1 0,5 0,05 0,1 0,5 0,05 0,1 0,5

Рост коллоний — — — — — — —

Проведенные исследования позволили выделить оптимальные составы прописей мазей противоаллергического действия для наружного применения, содержащих сухой водорастворимый экстракт:

1. Мазь на основе № 6 — №-КМЦ: сухой экстракт — 5,0 №-КМЦ — 5,7; глицерин — 9,5 нипагин-нипазол (7,5:2,5)-0,05 вода очищенная — 79,8

2. Мазь на основе № 4 — основа Грецкого [10]: сухой экстракт — 5,0

вазелин — 38,0 пентол- 3,8

пчелиный воск — 1,9 нипагин-нипазол (7,5:2,5) — 0,05 вода очищенная — до 100,0

Выводы

1. Разработан оптимальный состав

мази противоаллергического действия с сухим экстрактом из сбора лекарственного растительного сырья.

2. Предложена технология приготовления и определены биофармацевтические

показатели предлагаемого состава мази.

3. Установлены сроки годности и условия хранения прописи мазей противоаллергического действия.

Сведения об авторах статьи:

Афанасьева Юлия Геннадьевна — к.фарм. наук, доцент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ГБОУ ВПО БГМУ Минздравсоцразвития России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина З.Тел. (347) 271-22-85. E-mail: ufajulia@mail.ru

Сысоева Татьяна Викторовна — соискатель кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии БГОУ ВПО БГМУ Минздравсоцразвития России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина 3.

Кильдияров Фанис Хамидуллович — к.фарм. наук, доцент кафедры фармацевтической технологии ГБОУ ВПО БГМУ Минздравсоцразвития России. Адрес: 450000, г. Уфа, ул. Ленина 3. Тел. (342) 273-61-47.

ЛИТЕРАТУРА

1. А. с. 1507394 А1. Способы количественного определения флавоноидов в растительном сырье / В.В. Беликов, Н.Т. Колесник. -Государственный комитет по изобретениям и открытиям № 4301201; заявл 25.08.87, опубл. 15.09.1989, Бюл. № — 34. — 3 с.

2. Атопический дерматит // Клинические рекомендации. Педиатрия / под ред. А.А. Баранова. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. — С. 1735.

3. Дерматовенерология / Е.В. Соколовский, Е.Р. Аравийская, К.Н. Монахов [и др.] / под ред. Е.В. Соколовского. — М.: Академия, 2005. — 528 с.

4. Афанасьева, Ю.Г. Влияние извлечения из ряда лекарственных растений на иммунный ответ в эксперименте / Ю.Г. Афанасьева, Т.В. Пахомова, Н.Ж. Басченко, В.В. Сперанский // Растительные ресурсы. — 2008. — Вып. 3. — С. 118-122.

5. Глушко, Е.В. Эпидемиология аллергических заболеваний у детей Ставропольского края: автореф. дис. … канд. мед. наук. -Ставрополь 2009. — 22 с.

6. Временные инструкции по проведению работ с целью установления сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения » при повышенной температуре: Приказ МЗ СССР и ММП № 4301224 от 18 апреля 1983 года.

7. Государственная фармакопея СССР /гл. ред. М.Д. Машковский.-11-е изд. -М.:Медицина, 1989.-Вып.2:Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. — 397 с.

8. Даутов, Ф.Ф. Аллергическая заболеваемость детского населения города с развитой нефтехимической промышленностью / Ф.Ф. Даутов, Р.Ф. Хакимова, Н.З. Юсупова [и др.] // Гигиена и санитария. — 2009. — № 3. -С.54-57.

9. Мавлянов, И.Р. Аллергические осложнения на лекарства и сезонная характеристика их встречаемости / И.Р. Мавлянов, А.Ш. Касымов, З.И. Мавлянов, Н.М. Каримова [и др.] // Вестник восстановительной медицины. Диагностика. Оздоровление. Реабилитация: орган Ассоциации специалистов восстановительной медицины. — 2022. — № 5. — С. 68-71

10. Патент на изобретение № 2353348 “Мазь для лечения аллергических заболеваний кожи широкого спектра действия”/ Афанасьева Ю.Г., Кильдияров Ф.Х., Хисматуллина З.Р., Сысоева Т.В.

11. Anandan, C. Epidemiology and current status of allergic rhinitis, asthma, and associated allergic diseases in Korea: ARIA Asia-Pacific workshop report / Anandan C. Gupta R. Simpson C.R. Fischbacher C. Sheikh A. // Journal of the Royal Society of Medicine.- 2009. Vol.-102(10). — P. 431-42.

12. Dorner, T. Epidemiology of allergies in Austria. Results of the first Austrian allergy report / Dorner T., Lawrence K., Rieder A., Kunze M., // Wiener Medizinische Wochenschrift. — 2007. Vol.- 157(11-12). — P. 235-42.

13. Epidemiological and immunological evidence for the hygiene hypothesis. Garn H. Renz H. Immunobiology. — 2007. Vol.- 212(6). — P. 441-52.

14. Yoda, S. Epidemiological survey of allergic diseases in first-year junior high school students in Wakayama Prefecture in 2003 / Yoda S., Enomoto T., Dake Y., Ikeda H., Shibano A. // Journal of the Oto-Rhino-Laryngological Society of Japan. — 2006. Vol. 109(10). — P. 742-8.

УДК 616-091.811

В.В. Плечев, Б.А. Олейник, Р.Ю. Рисбрег, Д.В. Плечева НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ СТИМУЛЯЦИИ НЕОАНГИОГЕНЕЗА ПРИ ОСТРОМ ИНФАРКТЕ МИОКАРДА У КРОЛИКОВ

ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа

В работе рассмотрены новые методы стимуляции неоангиогенеза при остром инфаркте миокарда. Проведена оценка эффективности применения препаратов «Иммурег» и «Аллоплант-стимулятор васкулогенеза» для стимуляции роста новых сосудов. В эксперименте использовались 112 кроликов-самцов породы шиншилла весом 2,0-2,5 кг. У животных воспроизводилась модель инфаркта миокарда путем перевязки передней нисходящей артерии. После этого подопытные животные были выведены из эксперимента. Выполнена оценка экспрессии генов actine, fgf2, hgf, igf-1 и vegfa у разных групп сравнения методом количественной ОТ-ПЦР в реальном времени.

Ключевые слова: экспрессия, ген, инфаркт, кролик, неоангиогенез, реваскуляризация.

V.V. Plechev, B.A. Oleinik, R.Yu. Risbreg, D.V. Plecheva NEW OPPORTUNITIES OF NEOANGIOGENESIS STIMULATION IN ACUTE MYOCARDIAL INFARCTION IN RABBITS

The paper discusses new methods of neoangiogenesis stimulation in acute myocardial infarction. The efficacy of drugs «Im-mureg» and «Alloplant vasculogenesis stimulant» for stimulation of the growth of new blood vessels has been evaluated. The experiment observed 112 male Chinchilla rabbits weighing 2.0-2.5 kg. The left anterior descending artery was ligated to reproduce the model of myocardial infarction in animals. After the test the animals were removed from the experiment. The estimation of gene expression actine, fgf2, hgf, igf-1 and vegfa in different comparison groups by quantitative RT-PCR in real time has been carried out.

Key words: expression, gene, heart attack, rabbit, neoangiogenesis, revascularization.

Ишемическая болезнь сердца остается Высокий уровень летальности при инфаркте

одной из главных причин, определяющих вы- миокарда во многом определяется особенно-

сокий уровень инвалидизации и смертности стями регенерации миокарда. У человека на

работоспособного населения во всём мире. поздних стадиях онтогенеза кардиомиоциты